微生物都可以用超低溫來保管， 超低溫保管法是適用范圍廣泛的微生物保管法。 需求雜亂養(yǎng)分的微生物種， 如用其他的儲(chǔ)存辦法不能堅(jiān)持其生機(jī) （如 植物的病原性真菌） ，一般可用超低溫的辦法保管（ ATCC1983；Halliday ， Baker1985） 。MVE液氮罐


      此法是將凍存在小管或安瓿里的細(xì)胞以較慢的冷凍速率（1℃／分 鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管儲(chǔ)存在—150～－196℃的液氮中。 超低溫的冷凍保護(hù)劑不同于凍干法所用的冷凍劑。ATCC 常用一種由甘油 （10％） 、二甲亞砜（5％）和培養(yǎng)液制成的混合劑保管大都的細(xì)胞株。


液氮罐超低溫保存方法詳述
 
      這些化學(xué) 試劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)可防止內(nèi)膜的冷凍損傷。 儲(chǔ)存在低溫容器內(nèi)的細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)有必要當(dāng)心操作。當(dāng)小管被加熱時(shí)，所構(gòu)成的 冰晶會(huì)將細(xì)胞殺死， 正確操作就可防止這種事端。只需敏捷將樣品凍結(jié)就能削減 生機(jī)的丟掉，做法是：將封口的小管敏捷放入 37℃的水中，直至一切的冰消融， 然后翻開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。 超低溫保藏的微生物有必要一直儲(chǔ)存在溫度十分低的環(huán)境中，因而需求液氮 罐。在長時(shí)間儲(chǔ)存的過程中有必要常常注意彌補(bǔ)液氮。

  這種儲(chǔ)存辦法比凍干法需求更 多的經(jīng)費(fèi)，包含為了保持儲(chǔ)存溫度所必要的勞動(dòng)力和液氮等。

1 資料 病毒超低溫保管所需資料有：熱收縮塑料管（NuncCryoflex） ，液氮罐，防 護(hù)手套和面罩，記號筆，氣體噴燈，裝液氮的保溫瓶。

2 辦法
（1）剪一段兩頭各超出冷凍管長度 2cm 的熱收縮塑料管。
（2）將富含弄清病毒懸液（安排培養(yǎng)的上清培養(yǎng)基，或安排培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì) 胞溶解產(chǎn)品均可）冰浴幾分鐘，用滅菌移液管將 0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到 冷凍管內(nèi)，并將蓋子擰緊。
（3）將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部，刺進(jìn)正確的標(biāo)簽。
（4）用噴燈當(dāng)心加熱熱收縮塑料管，并使之包住冷凍管。注意不要用太高 的溫度加熱熱收縮塑料管。
（5）再當(dāng)心加熱熱收縮塑料管的兩頭，用大號鑷子夾緊管的端口至*密 封。
（6）將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍（操作時(shí)需求戴面 罩和手套） 。
（7）將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內(nèi)，一起記載樣品的具體的存 放方位、試驗(yàn)編號和寄存日期等。
（8）需求用時(shí)，敏捷從液氮罐內(nèi)取出所需樣品，并投入 37℃水浴箱中凍結(jié) 后，用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時(shí) 不需求除掉熱收縮塑料管。MVE液氮罐